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大鼠转化蛋白RhoA-GTP(RhoA-GTP)elisa试剂盒

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H-04-06-M05
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大鼠转化蛋白RhoA-GTP(RhoA-GTP)elisa试剂盒

⚙️ ‌一、核心技术参数‌

‌参数‌‌指标‌
‌检测原理‌‌双抗体夹心法‌:预包被抗RhoA-GTP单抗捕获抗原,HRP标记二抗催化TMB显色14
‌检测范围‌‌125–4000 pg/mL‌(梵态生物)或 ‌15.6–1000 pg/mL‌(博尔森生物)16
‌灵敏度‌‌≤125 pg/mL‌(最低检测限)14
‌孵育时序‌37℃抗原捕获60分钟 → 洗涤5次 → 加酶标二抗37℃孵育30分钟 → TMB避光显色10–15分钟14

‌样本处理规范‌

‌样本类型‌‌关键步骤‌
‌血清/血浆‌EDTA/肝素抗凝,‌2000–3000×g离心15分钟‌,避免溶血或脂质残留14
‌组织匀浆‌按1:9 (w/v)加预冷PBS(含蛋白酶抑制剂),冰上匀浆后 ‌5000×g离心10分钟取上清‌46
‌保存条件‌‌-20℃分装冻存‌(长期需-80℃),反复冻融≤3次14
mermaidCopy Codegraph LR
A[样本预处理] --> B{类型}
B -->|血清/血浆| C[抗凝→离心]
B -->|组织| D[PBS匀浆→离心]
C & D --> E[稀释至线性范围]
E --> F[加样→37℃孵育60分钟]
F --> G[洗涤5次]
G --> H[加酶标二抗→37℃孵育30分钟]
H --> I[TMB避光显色10-15分钟]
I --> J[终止→450nm读值]

⚠️ ‌关键注意事项‌

  • ‌干扰控制‌:

    • ‌禁用NaN₃防腐剂‌(抑制HRP活性)14;

    • 高脂样本需 ‌10,000×g超速离心20分钟‌ 去除脂质干扰7;

  • ‌操作要点‌:

    • 显色阶段严格避光,单孔加样时间差≤10分钟47;

    • 标准品需梯度稀释建立校准曲线(如0/125/250/500/1000/2000 pg/mL)1;

  • ‌生物学关联‌:

    • RhoA-GTP通过调控肌动蛋白骨架重组,参与肝再生、轴突修复及肿瘤转移过程1011;

  • ‌应用限制‌:

    • ‌仅限科研用途‌,临床诊断需专用验证试剂盒14。


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