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大鼠转录激活因子-4(ATF4)elisa试剂盒

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H-04-06-M05
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大鼠转录激活因子-4(ATF4)elisa试剂盒

以下为大鼠转录激活因子-4(ATF4)ELISA试剂盒的核心技术参数、操作规范及科研应用总结:


🔬 ‌一、核心科研应用‌

  1. ‌内质网应激与疾病机制研究‌

    • 定量检测血清、血浆、组织匀浆及细胞裂解液中ATF4水平,解析其在内质网未折叠蛋白反应(UPR)中的调控作用,关联神经退行性疾病、代谢性疾病及肿瘤模型的应激通路机制1219;

  2. ‌药物靶点验证‌

    • 评估药物干预(如内质网应激诱导剂)对ATF4活化水平的调控效应19。


⚙️ ‌二、核心技术参数‌

‌参数‌‌指标‌
‌检测原理‌‌双抗体夹心法‌:预包被抗ATF4单抗捕获抗原,HRP标记二抗催化TMB显色13
‌检测范围‌‌0.156–10 ng/mL‌(常规)或 ‌46.875–3000 pg/mL‌(部分品牌)34;
‌灵敏度‌‌≤0.086 ng/mL‌(常规)或 ‌28.125 pg/mL‌(高敏试剂盒)39;
‌孵育时序‌37℃抗原捕获60分钟 → 洗涤5次 → 加酶标二抗37℃孵育30分钟 → TMB避光显色10–15分钟14。

‌样本处理规范‌

‌样本类型‌‌关键步骤‌
‌血清/血浆‌EDTA/肝素抗凝,‌2000–3000×g离心15分钟‌,避免溶血或脂质残留14;
‌组织匀浆‌按1:9 (w/v)加预冷PBS(含蛋白酶抑制剂),冰上匀浆后 ‌5000×g离心10分钟取上清‌49;
‌细胞上清液‌‌1000–3000×g离心10分钟‌去除颗粒物49;
‌保存条件‌‌-20℃分装冻存‌(长期需-80℃),反复冻融≤3次13。
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A[样本预处理] --> B{类型}
B -->|血清/血浆| C[抗凝→离心]
B -->|组织| D[PBS匀浆→离心]
B -->|细胞上清| E[直接离心]
C & D & E --> F[稀释至线性范围]
F --> G[加样→37℃孵育60分钟]
G --> H[洗涤5次]
H --> I[加酶标二抗→37℃孵育30分钟]
I --> J[TMB避光显色10-15分钟]
J --> K[加终止液→450nm读值]

⚠️ ‌关键注意事项‌

  • ‌干扰控制‌:

    • ‌禁用NaN₃防腐剂‌(抑制HRP活性)18;

    • 高脂样本需 ‌10,000×g超速离心20分钟‌ 去除脂质干扰9;

  • ‌操作要点‌:

    • 显色阶段严格避光,单孔加样时间差≤10分钟89;

    • 推荐≥3复孔,板内变异系数需‌<10%‌(板间<15%)38;

  • ‌数据解读‌:

    • 健康大鼠ATF4基础值缺乏统一标准,建议实验设立内参对照69;

  • ‌应用限制‌:

    • ‌仅限科研用途‌,临床诊断需专用验证试剂盒15。

📝 ‌三、品牌选型与优势‌

  1. ‌性能对比‌

    ‌品牌‌‌检测范围‌‌灵敏度‌‌特色‌
    ‌菲恩生物‌46.875–3000 pg/mL28.125 pg/mL精密度高(批内CV<8%)3;
    ‌帛科生物‌0.156–10 ng/mL0.086 ng/mL宽范围适配微量样本4;
    ‌源昇肽生物‌未明确详见说明书多物种兼容性强9;
  2. ‌价格参考‌

    • 96T规格:约1800元;48T规格:约1200元16。

‌安全提示‌:
终止液含 ‌2M H₂SO₄‌8,操作需穿戴防护装备;开封酶标板需干燥剂密封保存614。


‌生物学意义‌:ATF4作为内质网应激核心转录因子,其表达水平直接反映细胞应对蛋白质错误折叠的应激能力,是神经退行性疾病及代谢紊乱研究的关键靶点1213。


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