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大鼠组织蛋白酶S(Cath-S)elisa试剂盒-96T/48T

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H-04-06-M05
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大鼠组织蛋白酶S(Cath-S)elisa试剂盒-96T/48T

以下为大鼠组织蛋白酶S(Cath-S)ELISA试剂盒(96T/48T规格)的核心科研应用及技术规范总结:


🔬 ‌一、核心科研应用‌

  1. ‌纤维化疾病机制研究‌

    • ‌肝纤维化模型‌:定量检测血清或肝组织匀浆中Cath-S水平,揭示其通过降解细胞外基质(如弹性蛋白、层粘连蛋白)促进纤维化进程的作用,适用于药物干预效果评估12;

    • ‌皮肤纤维瘤病理分析‌:联合基质金属蛋白酶检测,解析Cath-S在肿瘤微环境中的蛋白酶网络调控机制1215。

  2. ‌炎症与免疫调控‌

    • ‌抗原提呈通路研究‌:检测巨噬细胞或树突状细胞裂解液中Cath-S浓度,评估其通过剪切MHC-II相关恒定链(Ii)调控抗原呈递的活性12;

    • ‌神经炎症模型‌:联合炎性因子(如IL-1β、TNF-α)检测,分析Cath-S在脑脊液或神经组织中的表达与神经退行性病变的关联612。


️ ‌二、检测操作规范‌

‌关键技术参数‌

‌参数‌‌指标‌
‌检测原理‌‌双抗体夹心法‌:预包被抗Cath-S抗体捕获抗原,HRP标记二抗催化TMB显色16;
‌检测范围‌‌15.6–1000 pg/mL‌(梯度稀释:1000→15.6 pg/mL)12;
‌灵敏度‌‌≤3.9 pg/mL‌(最低检测限)12;
‌孵育时序‌37℃抗原-抗体孵育60分钟 → 洗涤 → 加酶标二抗37℃孵育30分钟 → TMB避光显色10-15分钟18。

‌样本处理要求‌

‌样本类型‌‌关键步骤‌
‌血清/血浆‌EDTA抗凝,2000–3000×g离心15分钟;高脂样本需10000×g超速离心16;
‌组织匀浆‌按1:9 (w/v)加预冷PBS冰上匀浆,5000×g离心10分钟取上清36;
‌细胞裂解液‌反复冻融或超声破碎细胞,5000×g离心10分钟去除碎片311;
‌保存条件‌‌-80℃分装冻存‌,避免反复冻融(≤3次)610。
mermaidCopy Codegraph TB
A[样本预处理] --> B{类型}
B -->|血清/血浆| C[离心去杂质]
B -->|组织| D[冰上匀浆→离心]
B -->|细胞| E[裂解→离心]
C & D & E --> F[稀释至线性范围]
F --> G[加入预包被板]
G --> H[37℃孵育60分钟]
H --> I[洗涤+加酶标二抗]
I --> J[37℃孵育30分钟]
J --> K[TMB避光显色10-15min]
K --> L[终止→450nm读数]

⚠️ ‌关键注意事项‌

  • ‌术语特异性‌:

    • Cath-S为半胱氨酸蛋白酶家族成员,需区别于组织蛋白酶B/L/K等其他亚型612;

  • ‌干扰控制‌:

    • ‌禁用叠氮钠(NaN₃)‌:其抑制HRP活性,导致显色失败117;

    • 溶血/脂血样本需预处理,避免假性升高6;

  • ‌数据解读‌:

    • ‌健康大鼠无统一基线‌,需同步设置空白对照与模型对照组612;

    • 病理临界参考:肝纤维化模型组织中Cath-S可升高2倍以上12;

  • ‌应用限制‌:‌仅限科研‌,临床诊断需专用验证试剂盒26。


📊 ‌三、96T/48T规格对比‌

‌参数‌‌96T试剂盒‌‌48T试剂盒‌
‌检测通量‌可同时检测90样本+6标准品可同时检测42样本+6标准品
‌成本效益‌单价更低(约1800元)15单价较高(约1200元)15
‌适用场景‌大样本量筛选(如药物高通量筛)小规模预实验或低样本量研究

💎 ‌四、技术优势‌

  1. ‌高精准度‌:

    • 回收率>92%,板内变异系数<10%612;

    • 双抗体夹心法避免与APP片段等非靶标交叉反应617;

  2. ‌多模型兼容性‌:

    • 支持血清/血浆、组织匀浆、细胞裂解液等多类型样本611;

    • 联合基质金属蛋白酶检测可全面解析纤维化通路1215。

‌注‌:终止液含强酸(0.5M H₂SO₄),操作需佩戴防护装备10;显色阶段严格避光以防吸光度漂移810。


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